子宮組織富含平滑肌、內(nèi)膜上皮細(xì)胞及大量血管，結(jié)構(gòu)致密，細(xì)胞間連接緊密。傳統(tǒng)機(jī)械研磨方式容易破壞細(xì)胞膜完整性，導(dǎo)致活率偏低；而普通胰酶配方消化時(shí)間難以把控，過度消化同樣造成大量細(xì)胞損失。
通用組織消化酶MJ022可為多種實(shí)驗(yàn)組織定制配方，溫和高效，在保證消化效率的同時(shí)較大程度低維持細(xì)胞活性，適用于子宮、肌肉、皮膚等多種纖維性/軟組織。
實(shí)驗(yàn)材料清單
1. 實(shí)驗(yàn)對象：小鼠子宮組織
2. 消化試劑：MJ022 通用消化酶
3. 終止試劑：MJ102 酶解終止液
4. 裂紅試劑：MJ103 紅細(xì)胞裂解液 + FBS 200 μl
5. 純化試劑：MJ101 去碎片試劑
6. 耗材：消化管、濾網(wǎng)、離心機(jī)
7. 緩沖液：無菌 PBS（漂洗、重懸用）
8. 檢測試劑：AOPI 染料 + 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
單細(xì)胞懸液制備儀對小鼠子宮組織懸液制備的實(shí)驗(yàn)步驟詳解
1. 開機(jī)準(zhǔn)備：連接儀器電源，打開開關(guān)，選好子宮對應(yīng)程序備用。
2. 試劑解凍：將MJ022消化酶和MJ102終止液提前備好。（消化酶溶解后建議分裝成小瓶，避免反復(fù)凍融影響活性）切勿用溫?zé)崴苊饷富钚蕴崆跋陆怠?/span>
3. 取材：小鼠頸椎脫臼處死，迅速取出子宮，置于含 PBS 的培養(yǎng)皿中，放在冰上保存，減少細(xì)胞損傷。
4. 剪碎 · 加酶：用 PBS 漂洗子宮組織，眼科剪充分剪碎，放入消化管，加入MJ022 通用消化酶。
5. 核心消化步驟：將消化管放至凈信單細(xì)胞懸液制備儀模塊上，選擇“子宮”對應(yīng)程序，點(diǎn)擊運(yùn)行。中途可暫停查看消化狀態(tài)，判斷消化充分后及時(shí)停止，避免過消化。
6. 過濾 · 終止消化：用濾網(wǎng)過濾消化液，去除未消化組織塊；按比例加入MJ102終止液，快速滅活酶活性。
7. 離心 · 裂紅 · 去碎片：離心后棄上清，加入紅細(xì)胞裂解液，冰上裂紅幾分鐘，加入PBS+MJ101去碎片試劑，再次離心棄上清，洗滌細(xì)胞
8. 重懸 · 獲得單細(xì)胞懸液：加入少量無菌 PBS，輕柔吹打混勻管底沉淀，即得到高活性單細(xì)胞懸液，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
9. AOPI 染色 · 細(xì)胞計(jì)數(shù)：AOPI 雙熒光染色后上自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測，讀取細(xì)胞活率及濃度數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1. 試劑保存：MJ022 消化酶干粉時(shí)可4°C保存，溶解后須低溫保存。
2. 裂紅時(shí)間嚴(yán)格把控：MJ103 裂紅液冰上作用時(shí)間控制在幾分鐘，時(shí)間過長會(huì)對目的細(xì)胞產(chǎn)生影響，時(shí)間過短則裂紅不徹底。
3. 避免過度洗滌：清洗單細(xì)胞懸液次數(shù)不宜過多、時(shí)間不宜過長，否則會(huì)造成細(xì)胞損失，影響最終收獲量。
4. 低溫操作：取材后，除了儀器消化 37°C，其余操作組織始終置于冰上，離心、重懸等步驟均在低溫條件下進(jìn)行，最大程度保障細(xì)胞活性。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
AOPI 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測結(jié)果：活率 86.01%。使用凈信單細(xì)胞懸液制備儀可獲得高活性單細(xì)胞懸液，滿足流式細(xì)胞術(shù)、單細(xì)胞測序等高要求下游實(shí)驗(yàn)的樣本需求。
